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SILAC蛋白質(zhì)組分析技術(shù)
實(shí)驗(yàn)流程??
應(yīng)用領(lǐng)域
技術(shù)優(yōu)勢(shì)
細(xì)胞培養(yǎng)氨基酸穩(wěn)定同位素標(biāo)記（Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture, SILAC），是2002年丹麥Mann實(shí)驗(yàn)室對(duì)AACT技術(shù)作進(jìn)一步改進(jìn)而獲得，并開(kāi)始應(yīng)用于定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究，為**、系統(tǒng)地定性和定量分析復(fù)雜哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白質(zhì)組提供有效的解決方案。?
- 疾病標(biāo)志物篩選
- 作用機(jī)制研究
- 藥物作用靶點(diǎn)研究
- 特殊功能蛋白質(zhì)篩選
- 多個(gè)樣本混合后同時(shí)進(jìn)行分離、酶切和鑒定，后續(xù)實(shí)驗(yàn)對(duì)樣品的影響是一致的，減少了實(shí)驗(yàn)操作和儀器設(shè)備引入的定量誤差；
- 體內(nèi)標(biāo)記技術(shù)，標(biāo)記不受裂解液成分影響，效果穩(wěn)定，標(biāo)記效率高達(dá)99%；
- 可以對(duì)在DMEM、DMEM-F12、1640三種培養(yǎng)基中培養(yǎng)的多種細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記；
- 靈敏度高，樣本量要求少。
技術(shù)原理
?SILAC的基本原理是分別用天然同位素（輕型）或穩(wěn)定同位素（重型）標(biāo)記的必需氨基酸取代細(xì)胞培養(yǎng)基中相應(yīng)氨基酸，細(xì)胞經(jīng)>6個(gè)倍增周期后，穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸**摻入到細(xì)胞新合成的蛋白質(zhì)中取代了原有氨基酸。不同標(biāo)記細(xì)胞的裂解蛋白按細(xì)胞數(shù)或蛋白量等比例混合，經(jīng)分離、純化后進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。
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